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果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

貨號 SH0513 售價(元) 1200
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0513

果糖-1,6-二磷酸酯酶(FBP)檢測試劑盒(分光光度法 50T/48S)

50管48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

果糖-1,6二磷酸酶又稱果糖1,6二磷酸酯酶,催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機磷,在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。

測定原理:

FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機磷,在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下測定NADPH增加速率,即可計算FBP活性。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0513-50T/48S

Storage

提取液液體

50ml

4℃

提取液液體

50ml

4℃

試劑一:粉劑

1

-20℃

試劑二:液體

18μl

4℃

試劑三:粉劑

1

-20

試劑液體

50ml

4℃

說明書

一份

 

試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40ml試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;

試劑二:液體18μl×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5ml蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5ml蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;

自備儀器和用品:

分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

樣本的前處理:

FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1ml提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。

胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)1510的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1ml提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1ml提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。

建議測定總FBP酶活性,按照步驟提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟提取粗酶液。

測定步驟:

1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘

3、 加樣表:

試劑名稱(μl

測定管

樣本

100

試劑二

50

試劑三

50

試劑一

800

 

將上述試劑按順序加入1 ml石英比色皿中,立即混勻,加入最后一個試劑的同時開始計時,在340 nm波長下記錄反應(yīng)1min后吸光度A1和反應(yīng)6min后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。

FBP活性計算:

1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

FBPnmol/min/mg prot[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

FBPnmol/min/g 鮮重)[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1 ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g。

 

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