測定意義：

C1（EC3.2.1.91）存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi)，是纖維素酶系的組份之一，C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理：

采用3,5－二硝基水楊酸法測定S-C1催化微晶纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測定的準(zhǔn)備：

稱取約0.1g新鮮土樣或風(fēng)干土樣，加入1ml提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取30min，然后10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）

混勻，37℃準(zhǔn)確水浴2h

混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中，測540nm下吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

S-C1活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 6.4078x - 0.0673；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。

單位的定義：每g土樣每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11ml； V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，120 min； W：樣本質(zhì)量，g；

 b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 3.2039x - 0.0673；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.11ml； V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，120 min； W：樣本質(zhì)量，g。