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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

貨號 22112 售價(元) 600
規(guī)格 50 rxn CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品簡介

        miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(by stem-loop)是miRNA cDNA第一鏈合成的專用試劑盒(莖環(huán)法)。其中包含42℃, 2min的基因組DNA去除步驟,操作簡便,可快速消除基因組DNA的干擾。本產(chǎn)品包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶ToLoScript III RTase以及針對miRNA的基因組去除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)優(yōu)化的最適緩沖液,從而有利于miRNA特異性逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生成。建議使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal,#22204)進行cDNA產(chǎn)物后續(xù)定量。

產(chǎn)品優(yōu)勢

優(yōu)異的線性關(guān)系:在一定的模板區(qū)間內(nèi)具有優(yōu)異線性關(guān)系,模板含量最低檢測限可低至pg級。
最適的反應(yīng)體系:含有針對新一代逆轉(zhuǎn)錄酶ToLoScript III RTase,以及miRNA的基因組去除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)優(yōu)化的最適緩沖液,更有利于miRNA特異性逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的生成。

 實驗案例

         以293T細胞的miRNA的10倍稀釋梯度(1μg~10 pg)為模板,使用Tolobio#22112以及Supplier A,按照各自說明書推薦程序進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)擴增hsa-miR-19a基因。實驗結(jié)果顯示,在一定的模板區(qū)間內(nèi),本產(chǎn)品相比于同類產(chǎn)品具有優(yōu)異的線性關(guān)系。

實驗流程

1.基因組DNA去除
1.1去除gDNA反應(yīng)體系
室溫融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上,在RNase-free離心管中配制如下反應(yīng)體系:

組分

體積

5 × miR gDNA Erase-Out Mix

2 μL

Total RNA/miRNA

x μL(10 pg ~ 1 μg)

RNase-free ddH2O

Up to 10 μL

用移液器吹打混勻后短暫離心。

1.2 去除gDNA反應(yīng)程序

溫度

時間

42℃

2 min

2.第一鏈cDNA合成

2.1第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系

組分

體積

第1步的反應(yīng)液

10 μL

Stem-loop Primer (2 μM)

1 μL

10 × miR RT Buffer (stem)

2 μL

ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem)

1 μL

RNase-free ddH2O

Up to 20 μL

用移液器吹打混勻后短暫離心。

2.2第一鏈cDNA合成反應(yīng)程序

溫度

時間

25℃

5 min

50℃

15 min

85℃

2 min

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進行下游qPCR檢測。若短期內(nèi)不進行下游實驗,可-20℃保存。若需長期保存,建議分裝后保存于-80℃,避免反復(fù)凍融。

 產(chǎn)品組成

組分

22112 (50 rxn)

 5 × miR gDNA Erase-Out Mix

    100 μL

 10 × miR RT Buffer (stem) a

    100 μL

 ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) b

    50 μL

○ RNase-free ddH2O

    1 mL

a.包含dNTP;
b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。

 保存條件

       -20℃保存,≤ 0℃運輸;

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