產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

是一種細胞滲透型的carbocyanine結構衍生物，包含標記線粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。本品是一種亮綠色熒光探針（（Ex=490 nm，Em=516 nm）），其在水溶液中幾乎不發(fā)熒光，只有當聚集在線粒體的脂質(zhì)環(huán)境才能發(fā)熒光，背景熒光幾乎可忽略。使得操作步驟極其簡單，只需用探針孵育細胞，即可被動運輸穿過細胞膜并直接聚集在活性線粒體上，可不經(jīng)過清洗直接觀察。與線粒體紅色熒光探針同的是本品定位于線粒體的能力不受線粒體膜電位影響，使其可能作為定量線粒體質(zhì)量的一種工具。本品經(jīng)乙醛固定后染料不穩(wěn)定，因此更適合活細胞染色。

雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線粒體上，但是一旦線粒體膜電位喪失即會被洗掉，從而在一些需要細胞進行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實驗中，使其應用大受限制。

使用方法

1儲存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需將本品回溫至室溫。

之后使用細胞培養(yǎng)級別的無水DMSO將其充分溶解至終濃度1 mM。

本品M. Wt.= 671.88 g/mol，換算下來，50 μg粉末只需加入74.4μL DMSO即可得到1 mM儲存液。

可根據(jù)單次的使用量將儲存液分裝后放到-20℃避光，避免反復凍融。

2工作液的配制

根據(jù)不同的實驗目的使用不同的探針濃度，以下的起始操作條件僅作參考，可根據(jù)細胞類型和其他的相關因素如細胞或組織的透化等進行適當調(diào)整。

用適當?shù)木彌_液或者細胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲存液至工作液濃度。本探針推薦濃度為20-200 nM，濃度過高可能對其他細胞結構進行染色。

3染色及檢測

1）貼壁細胞的染色

培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進行爬片培養(yǎng)。當細胞長至所需豐度，吸除培養(yǎng)液，加入37℃預熱的染色工作液。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液，即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標儀下讀數(shù)。

2）懸浮細胞的染色

離心收集細胞，吸除上清，利用37℃預熱的染色工作液輕輕重懸細胞。在所使用細胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min（最佳孵育時間需優(yōu)化）。染色結束后，離心收集細胞，利用37℃預熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細胞，被染色的細胞可用流式細胞儀、熒光酶標儀、熒光顯微鏡進行分析。

注意事項

1）DMSO有毒，使用時請小心操作。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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